写在前面：作为该专题的第一篇，肯定得讲最重要的东西了——怎么养细胞🧫。要是细胞都养不活那后面的实验就都不用做了😂。。不同的细胞特性不一样，养的方式自然也不一样，不过大抵上是有个general procedure的，听我一一道来。
养细胞前 Before Culturing Cells
① Biosafety Cabinet (BSC, 生物安全柜)
所有关于cell culture的实验都必须在Biosafety Cabinet内进行。用之前要先穿好实验服🥼，戴好手套🧤，袖口用胶带扎起来，双手用酒精消好毒。 打开BSC并开灯后，工作台得用酒精擦一遍，所有要进入BSC的物品都得用酒精喷一遍，包括双手。如果手从里面出来又要进去，要再喷一遍，千万别嫌麻烦。如果这些杀菌消毒步骤没做好，细胞马上就能死给你看😵。
② Cell Culture Medium (细胞培养基)
比较常见的培养基有如DMEM，RPMI-1640……不同的细胞对于培养基的要求不一样，比如，我现在有在养的LNCaP细胞就需要RPMI-1640，Du145细胞就需要DMEM；如果用DMEM养LNCaP细胞，LNCaP是长不活的（以前不信邪，传细胞的时候试过😅）。有些细胞甚至比较挑剔，要特定的抗生素，或特定的什么配方。所以呀，养细胞前一定要先查查养的细胞要用什么培养基配方。
我们首先拿到的是Basal Medium (基础培养基，如图)，但肯定不能直接拿来养细胞的，培养基要用前要先过滤 (如图)，然后加补充物🧪。正常一定要加的是10% FBS (Fetal Bovine Serum, 胎牛血清)，有些实验室会加抗生素防止细菌污染🦠，但我们实验室是不加的，这就考验大家的技术了，杀菌工作一定要做好。
配好的培养基可以放在4℃冷藏，要用前放37℃水浴热上。
③ Other Materials
其他要用的试剂包括：Trypsin (Trypsin-EDTA, 0.25%, 胰蛋白酶)，PBS (Phosphate Buffered Saline, 磷酸缓冲盐水)
要用的器材包括但不限于：各种tubes，各种culture plates/dishes/flasks，各种pipettes，incubator (37℃, 5% CO2)，waste asperting system，water bath，ice……
新的袋装的器材要在BSC里面才能打开，用完用胶带封好才能拿出来，各种瓶瓶罐罐的要用autoclave过的。
Basal Medium
Medium先filter，并加10%FBS
常见养细胞布置如图（我的习惯是这样↑，每个人习惯可能不一样，但sterilize工作一定得做好）
细胞传代 Cell Passaging
这是我正养着的两盘Du145细胞
我一般会写上细胞类型，日期，和细胞的用途（keep，for transfection, for freezing, new-thaw…)
细胞传代是养细胞的关键步骤，一般一盘细胞长到70-90%传下一代。所以养细胞时要每天都要看看细胞的状态🔬，太满或太久没换培养基的话细胞就死翘翘了，而且每天观察一下也能确保细胞没被contaminate。我现在养的细胞都是贴壁长的，如果哪天看到全浮在培养基里，那就是挂了😂
标准的cell passaging过程如下：首先先用细玻璃吸管吸走旧的培养液，接着缓慢地加PBS轻轻地洗一遍细胞。吸走PBS后加一两毫升的trypsin，放回incubator里等个三分钟⏱️，这个过程是让trypsin消化蛋白让细胞从盘上脱落。细胞脱落后往里加入一定量的培养基停止酶的反应（我习惯是加到十毫升），给它混匀并吸出到离心管里。然后1000 rpm 离心个三分钟，让细胞分离出来。吸走上清液后，用新鲜培养基重新混匀细胞。接着就是按你想要的比例种到盘里了，如果长得快的细胞可能传少点，稀释1:10甚至0.5:10；长得慢的可能多传点，二传十或者更高；这个步骤取决于不同细胞，还取决于你的实验安排，哪时候要细胞，要长快点还是慢点。。。种好细胞给它晃匀后放incubator等它长就行了。
我自己的做法呢，肯定很不标准啦😅(bushi。每个人习惯不一样，做法当然不同了。比如说吸走旧的培养基之后我经常不用PBS洗，直接加trypsin让它脱落，这也不是不行，就是得在incubator放久点或者trypsin量多点。对于一些特定的细胞系，像293T，Hela，或者DuNE，其实不用加trypsin，洗一下就掉，我也会跳过加trypsin的步骤直接离心。不过如果太久没用trypsin的话也会出问题的，细胞最后会结块，影响后续的实验。每个人的习惯也许不一样，但总的来说，传细胞不但要把手练熟了，也要对细胞的生长态势做好判断，让细胞长得符合你预期的效果是最好的。毕竟是我们在养细胞，而不是细胞在养我们😁
未完待续…… To be contine…